СТВОРЕННЯ КОНСТРУКЦІЙ ДЛЯ БАГАТОКОПІЙНОЇ ІНТЕГРАЦІЇ ГЕНІВ ІНТЕРЕСУ В ДЕЛЬТА ПОСЛІДОВНОСТІ ГЕНОМУ ДРІЖДЖІВ

Автор(и)

  • О. Г. Підкурганна Інститут харчової біотехнології та геноміки НАН України, Україна
  • Л. Б. Зелена Інститут харчової біотехнології та геноміки НАН України, Україна
  • С. М. Шульга Інститут харчової біотехнології та геноміки НАН України, Україна

Ключові слова:

S. cerevisiae, CRISPR/Cas9, delta integration, genome engineering

Анотація

Yeasts are attractive cell factories for recombinant protein production. Stable integration and high-copy number of gene interest are essential for strain productivity. Constructions designed in this work are intended for CRISPR-mediated multi-copy integrations into delta-sites of Saccharomyces cerevisiae genome.

Посилання

Chaudhary R, Nawaz A, Fouillaud M, Dufosse L, Haq I, Mukhtar H. Microbial cell factories: biodiversity, pathway construction, robustness, and industrial applicability. Microbiol. Res. 2024 Feb 12;15(1):247-272.

Madhavan A, Arun KB, Sindhu R, Krishnamoorthy J, Reshmy R, Sirohi R, Pugazhendi A, Awasthi MK, Szakacs G, Binod P. Customized yeast cell factories for biopharmaceuticals: from cell engineering to process scale up. Microb Cell Fact. 2021 Jun 30;20(1):124.

Karim AS, Curran KA, Alper HS. Characterization of plasmid burden and copy number in Saccharomyces cerevisiae for optimization of metabolic engineering applications. FEMS Yeast Res. 2013 Feb;13(1):107-16.

Shi S, Liang Y, Ang EL, Zhao H. Delta integration CRISPR-Cas (Di-CRISPR) in Saccharomyces cerevisiae. Methods Mol Biol. 2019;1927:73-91.

Malci K, Walls L, Rios-Solis L. Multiplex genome engineering methods for yeast cell factory development. Front. Bioeng. Biotechnol. 2020 Oct 29;8:589468.

Lee ME, DeLoache WC, Cervantes B, et al. A highly characterized yeast toolkit fir modular, multipart assembly. ACS Synthetic Biology 2015;4:975–986.

Green MR, Sambrook J. Preparation of plasmid DNA by alkaline lysis with sodium dodecyl sulfate: Minipreps. Cold Spring Harb Protoc. 2016 Oct 3;2016(10).

Weber E, Engler C, Gruetzner R, Werner S, Marillonnet S. A modular cloning system for standardized assembly of multigene constructs. Plos One. 2011;6(2):e16765.

Chang AY, Chau VWY, Landas JA, Pang Y. Preparation of calcium competent Escherichia coli and heat-shock transformation. JEMI meth. 2017 Jun;1:22-5.

Pidkurhanna OH, Zelena LB, Shulga SM. The plasmid construction for Saccharomyces cerevisiae genome editing with CRISPR/Cas9. In: Modern aspects of microbiology, virology, and biotechnology in wartime and post-war period; November 15-16,2023; Kyiv. Kyiv: D.K. Zabolotny institute of microbiology and virology of the NAS of Ukraine; 2023. p.183-184.

##submission.downloads##

Опубліковано

2024-05-17